Introducción
Desde el año 2002, en el laboratorio de Biología Molecular perteneciente al Servicio de Biología Molecular del Hospital Virgen Macarena, dirigido por el Dr. Miguel Lucas se ha trabajado para desarrollar y mejorar la técnica utilizada en la determinación de bandas oligoclonales de IgG (BOCG) en el líquido cefalorraquídeo de los pacientes del hospital a los que se realiza una punción lumbar por la sospecha de padecer una esclerosis múltiple (EM). Son muy pocos los laboratorios en los que se lleva a cabo la determinación de BOC de IgG. En España hay pocos laboratorios que realicen esta técnica siendo actualmente Madrid, Barcelona y  Sevilla  los principales receptores de las mismas.
En poco tiempo se  ha  implantado la técnica  con eficacia y  se ha comenzado a realizar determinaciones de pacientes no sólo del propio hospital, sino también de otros hospitales sevillanos. Los buenos resultados obtenidos así como la presentación de los mismos en diversos congresos de interés internacional,  han llevado  a la recepción y estudio de muestras de pacientes provenientes de otras comunidades autónomas. La base cuenta en estos momentos con datos de más de 3000 muestras de LCR lo que  posiciona al laboratorio como un grupo muy sólido para la investigación en LCR.

 
Procesamiento de muestras recibidas.
El procesamiento de las muestras biológicas se lleva a cabo de manera semiaséptica y con limpieza absoluta de los instrumentos y superficies de trabajo así como con la protección adecuada para el personal de laboratorio. 
Las muestras Neurológicas son extraídas al paciente por el profesional correspondiente utilizando siempre el recipiente adecuado a tal efecto (como tubos esterilizados para el caso de la extracción del LCR por el neurólogo). Una vez recibidas en el laboratorio, las muestras son  procesadas por técnicos especialistas que las dividirán en alícuotas y congelarán a -80ºC convenientemente etiquetadas y almacenadas en cajas identificadas con el número de registro de entrada.


Los frigoríficos congeladores son monitorizados para controlar las posibles fluctuaciones de temperatura y se dispone de un sistema electrógeno de utilización en caso de caída del sistema eléctrico.
Las muestras son recogidas por el personal técnico cualificado que se encarga  de su almacenamiento y su  mantenimiento en óptimas condiciones .
Las muestras son alicuotadas de la siguiente forma:

  1. En la base de datos del banco se introducen los datos del paciente (nombre, edad y fecha y número de registro a la entrada)
  2. Los sueros son centrifugados y el sobrenadante alicuotado en tubos de criocongelación perfectamente etiquetados con el número de referencia del paciente, en alícuotas de 0.5 ml (entre 4 y 6 alicuotas)
  3. El líquido cefalorraquídeo se centrifuga para eliminar las células y el sobrenadante se alícuota en tubos de criocongelación perfectamente etiquetados con el número de referencia del paciente, en alícuotas de 0.3ml (entre 10 y 20 muestras por paciente)
  4.  En la base de datos se introduce la localización de la muestra así como el numero de alícuotas pareadas que se obtiene de cada uno de los pacientes.
  5. Las muestras son guardadas a -80 ºC.
 

La técnica desarrollada en el laboratorio de Biología Molecular es la que más alta sensibilidad y especificidad ha demostrado hasta el momento, isoelectroenfoque seguido de inmnodetección con anticuerpos específicos frente a IgG humana . Basada en la técnica de Sádaba MC, González Porqué P, Masjuan J, Álvarez-Cermeño JC, Bootello A,  Villar LM. An ultrasensitive method for the detection of oligoclonal IgG bands. Journal of Inmunological Methods 284 (2004) 141-145,   se  han mejorado algunos aspectos de la misma para obtener un protocolo propio del laboratorio. El estudio de las BOC de IgG se realiza mediante isoelectroenfoque en paralelo de muestras de suero y LCR de un mismo paciente. El suero es el control del ensayo pues no debe mostrar síntesis adicional de inmunoglobulina G presentando un patrón denominado policlonal.

 

Uno de los objetivos más importantes que se planteó cuando se comenzó con el servicio BOCG  fue que el neurólogo recibiera los resultados de las pruebas de la manera más rápida y eficaz posible. De ésta manera la espera de  los datos provenientes del laboratorio no son un impedimento para el tratamiento precoz y el rápido seguimiento del paciente una vez diagnosticado de esclerosis múltiple definida. Para llevar  a cabo este propósito, desde la Unidad de Esclerosis Múltiple del Servicio de Neurología del Hospital Virgen Macarena se ha desarrollado una página web (www.neuroinvest.net) a través de la cual  se envían mediante correo electrónico todos los resultados de los análisis de BOC de IgG del LCR de los pacientes estudiados en el Hospital Virgen Macarena. La página mantiene todos los sistemas de seguridad y confidencialidad requeridos hoy en día en el tratamiento de datos. 
Cada uno de los neurólogos tiene su propio escritorio al que accede única y exclusivamente mediante una clave particular y en el cual puede ver todos sus pacientes además de las imágenes de las propias bandas oligoclonales. Esta página permite mantener un continuo contacto con los médicos y  acortar enormemente el tiempo de recepción de los resultados.  Actualmente trabajamos con  21 hospitales de toda España recibiendo  del orden de setecientas muestras anuales.


Este sistema informatizado de imágenes nos permite además, realizar estudios de investigación tanto prospectivos como retrospectivos de las BOCG, pues una vez escaneadas las membranas de nitrocelulosa permanecen almacenadas en ficheros individuales utilizables en cualquier momento y sin pérdida de nitidez ni  deterioro de las imágenes.